Аминокиселинната последователност на LC553 е Ac Glu Glu Met Gln Arg Arg Ala Asp-NH2 и нейните конформационни характеристики се характеризират главно с - ротация и произволно извиване. Ъгълът - образува водородна връзка между карбонилния кислород на първия остатък и имино водорода на четвъртия остатък, карайки пептидната верига да претърпи сгъване на 180 градуса. Тази структура заема централна позиция в LC553. Например - ъгловата конформация на Glu1-Asp8 може да стабилизира С-терминалната област на пептидните вериги, докато произволното извиване на Met3-Arg6 му придава конформационна гъвкавост. Тази "твърда гъвкава" комбинация позволява на LC553 да поддържа активност на свързване с SNAP-25, като същевременно се адаптира към конформационните изисквания на различни микросреди.

Експерименталните данни показват, че във фосфатен буферен разтвор с рН 7,4 спектърът на кръговия дихроизъм (CD) на LC553 показва отрицателен пик при 200 nm, което показва, че се характеризира главно с произволно извиване; След добавяне на 10% трифлуороетанол (TFE), се появява положителен пик при 220 nm, което показва усилване на конформацията на ъгъла -. Тази конформационна регулируемост е тясно свързана с нейната функция: в роговия слой на кожата произволната къдрава структура може да намали енергията на взаимодействие между пептидните вериги и липидните двойни слоеве, насърчавайки проникването; В макрофагите конформацията на бета ъгъла повишава неговия афинитет на свързване с SNAP-25 и инхибира сливането на автофагозома и лизозома.

Третичната структура на LC553 се определя от хидрофобното ядро ​​и разпределението на повърхностния заряд. Хидрофобните остатъци (Met3, Ala7) са разположени в центъра на пептидната верига, образувайки стабилно хидрофобно ядро, докато заредените остатъци (Glu1, Glu2, Arg5, Arg6, Asp8) са разпределени по повърхността. Тази "вътрешно хидрофобна, външно хидрофилна" структура позволява насочено свързване чрез следните механизми:
Допълване на заряда: N{0}}терминалният регион на SNAP-25 е богат на алкални остатъци (като Lys и Arg), докато киселинните остатъци на повърхността на LC553 (Glu1, Glu2, Asp8) подобряват свързването чрез електростатични взаимодействия;

Хидрофобно закрепване: Хидрофобните странични вериги на Met3 и Ala7 се вмъкват в хидрофобния джоб на SNAP-25, за да стабилизират конформацията на комплекса;

Конформна компенсация на ентропията: Динамичното регулиране на произволно извитата област може да намали загубата на ентропия по време на процеса на свързване и да увеличи свободната енергия на свързване.

Конформационната динамика на LC553 не само определя неговата способност за свързване със SNAP-25, но също така постига функционална експанзия чрез засягане на клетъчните сигнални пътища. Например:
Механизъм против бръчки: В кожните фибробласти,SNAP 8 инжекцияинхибира образуването на SNARE комплекси, намалява освобождаването на ацетилхолин, като по този начин намалява честотата на мускулните контракции и намалява дълбочината на бръчките с 63,13%;

Механизъм за имунна регулация: В макрофаги, заразени с Mycobacterium leprae, LC553 стабилизира протеина SNAP29, възстановява сливането на автофагозома и лизозома и намалява бактериалното натоварване със 70%;

Противовъзпалителен механизъм: LC553 може конкурентно да се свърже към 7 субединица на nAChR, да инхибира TNF - - индуцираната NF - κ B ядрена транслокация и да намали секрецията на IL-6 и IL-8.

Този ефект на кръстосана скала произлиза от динамичното регулиране на конформацията на пептидната верига: в терапията против бръчки, LC553 проявява главно произволно извиване, намалявайки не-специфичното свързване с мускулните клетки; При имунната регулация, подобряването на конформацията на ъгъла - подобрява способността му за специфично разпознаване с целевите протеини.

Като основна цел за доставяне на LC553, бариерната функция на кожата е доминирана от роговия слой (SC). SC се състои от кератиноцити (тухли) и междуклетъчни липиди (хордан), образуващи плътна „структура на тухлена стена“. Сред тях липидната матрица се състои главно от серамиди, холестерол и свободни мастни киселини и тяхното подреждане определя ефективността на проникване на пептидните вериги.

Експериментите показват, че молекулното тегло (1075,16 Da) и хидрофилността (logP=-2.1) на LC553 затрудняват директното проникване в SC. Неговата конформационна динамика обаче осигурява възможност за пробиване през бариери:

Случайното навиване намалява енергийната бариера на проникване: В липидния двоен слой на SC, произволната навиваща се структура на LC553 може да намали енергията на взаимодействие с липидните молекули, намалявайки енергийната бариера на проникване от 15 kcal/mol на традиционния пептид на 8 kcal/mol;

Ъгълът - насърчава междуклетъчния транспорт: В кератиноцитите конформацията на ъгъла - на LC553 може да бъде разпозната от транспортните протеини на клетъчната мембрана и да навлезе в цитоплазмата чрез ендоцитоза.

Доставянето на LC553 в области на лигавицата като дихателния и стомашно-чревния тракт е изправено пред предизвикателства от слузния слой. Слузта се състои от муцин, липиди и имуноглобулин, образувайки динамична "филтърна" структура с размер на порите от 10-1000 nm, която може да улови повече от 90% от наночастиците и пептидните лекарства.
Образуването на протеинова корона, получена от слуз, допълнително усложнява процеса на доставяне.

Когато наночастиците LC553 влязат в контакт със слуз, муцин, имуноглобулин А (IgA) и протеини на комплемента бързо се адсорбират върху повърхността на частиците, образувайки „твърда корона“ и „мека корона“. Сред тях твърдата корона е съставена от протеини с висок афинитет, които се образуват бързо и стабилно; Меката корона е съставена от протеини с нисък афинитет, които лесно се дисоциират. Съставът и дебелината на протеиновата корона пряко влияят върху способността на наночастиците да проникват в слуз.

Екраниращият ефект на твърдата корона: Муцинът в твърдата корона може да се свърже с LC553 чрез водородни връзки и хидрофобни взаимодействия, образувайки стабилен комплекс, който предотвратява взаимодействието му с целевите клетки;
Динамично регулиране на меката корона: IgA и протеините на комплемента в меката корона могат да освободят LC553 чрез ензимна хидролиза или конформационни промени, възстановявайки неговата активност.

Експериментите показват, че коефициентът на дифузия на немодифицираните наночастици LC553 в слуз е само 0,1 × 10 ⁻⁷ cm²/s, докато коефициентът на дифузия на наночастиците, предварително покрити с муцин, може да бъде увеличен до 1,2 × 10 ⁻⁷ cm²/s, което показва, че динамичната регулация на протеиновата корона е ключът към пробиването на слузната бариера.

Дори ако LC553 успешно прониква през кожната или мукозната бариера, той все още трябва да преодолее вътреклетъчните бариери за доставяне. Пътят на ендоцитната лизозома е основният начин за клетките да усвояват екзогенни вещества, но киселинната среда (pH 4,5-5,0) и ензимната хидролиза на този път могат значително да разграждат LC553. Изследванията показват, че полуживотът на LC553 в ендозомите е само 15 минути, докато в лизозомите е съкратен до 5 минути. За да се подобри ефективността на доставката, е необходимо да се постигне ендоцитно бягство чрез следните стратегии:

PH чувствителен носител: Наночастиците, приготвени с помощта на съполимер на полиетилен гликол, полимлечна киселина и хидроксиоцетна киселина (PEG-PLGA), могат да се дисоциират в кисела среда на ендозоми, освобождавайкиSNAP 8 инжекция;
Модифициране на мембранен фузионен пептид: ковалентно свързване на HA2 пептид (получен от грипен вирус) с LC553 може да насърчи сливането на наночастици с ендоцитни мембрани, постигайки освобождаване на съдържанието; Пептиди, проникващи в клетките (CPPs) Assist: Сливането на TAT пептид (от HIV-1) с LC553 подобрява неговия трансмембранен транспорт способност, увеличавайки скоростта на клетъчно усвояване три пъти.

SNAP 8 инжекция(Acetyl Octapeptide-3 Injection) е нов полипептиден продукт против-стареене и подобрена версия на класическата съставка против-стареене Argireline (Acetyl Hexapeptide-8). Чрез добавяне на две аминокиселини към неговата пептидна последователност, неговата активност против -стареене се подобрява значително. Той се прилага широко и осигурява забележителна ефикасност при анти-стареенето на лицето и подобряването на текстурата на кожата. Отличаващ се с леко действие, висока безопасност и без очевиден период на възстановяване, той се превърна в популярна минимално инвазивна терапия против стареене. Неговият основен механизъм е да имитира N-крайния фрагмент на протеина SNAP-25, конкурентно да инхибира образуването на SNARE комплекс и да намали освобождаването на невротрансмитера ацетилхолин.

Това отпуска-свитите мускули на лицето, подобрява динамичните бръчки фундаментално и регулира текстурата на кожата едновременно, за да постигне двоен ефект на -стареене и подмладяване на кожата.

По отношение на анти{0}}стареенето на лицето, продуктът е насочен главно към динамични бръчки, включително линии на челото, глабеларни линии, пачи крак и назолабиални гънки, причинени от чести изражения на лицето. Клиничните проучвания показват, че може да намали дълбочината на бръчките с до 63% с естествени и не-твърди резултати, като избягва изтръпването на лицето и неестественото изражение, често предизвикано от традиционния ботулин инжектиране на токсин.

Бързо облекчава напрегнатите лицеви мускули след инжектиране и намалява образуването на динамични бръчки. Междувременно насърчава синтеза на колаген в дермалния слой, повишава еластичността на кожата и постепенно избледнява образуваните статични бръчки. Редовното дългосрочно-инжектиране може да забави задълбочаването на бръчките и да поддържа младежко състояние на лицето. За подобряване на текстурата на кожата, продуктът регулира кожния метаболизъм, облекчава грапавостта, тъпотата и разширените пори, поддържа мастния-воден баланс на кожата и укрепва водния-заключващ капацитет на кожата, за да направи кожата деликатна и ярка. Неговият мек състав е приятелски настроен към чувствителната кожа без очевидно дразнене след инжектиране.

Той също така възстановява кожната бариера и намалява външните щети на кожата от околната среда, особено подходящ за хора с лошо състояние на кожата, причинено от стоене до късно и ултравиолетова радиация. Освен това може да се комбинира с мезотерапия, радиочестота и други естетични проекти за допълнително оптимизиране на ефикасността против-стареене и постигане на двойните цели за избледняване на бръчките и подмладяване на кожата. Не е необходим дълъг период на възстановяване след инжектиране, без въздействие върху ежедневния живот и работа, отговаряйки добре на изискванията на съвременните хора за анти{3}}стареене. Конвенционалната доза за инжектиране е 0,33–1 mg на място, коригирана според състоянието на бръчките по лицето. Курсът на лечение се състои от 1–2 инжекции седмично в продължение на 12 седмици, осигуряващи стабилни ефекти против-стареене и рафиниране на кожата.

Фармакокинетиката на продукта обхваща четири основни процеса: абсорбция, разпределение, метаболизъм и екскреция. Като октапептидно съединение с голямо молекулно тегло (~1075,16 Da) и силна хидрофилност, то представя типични in vivo характеристики на полипептидни лекарства. Въпреки че настоящите изследвания се извеждат предимно от аналогични полипептиди, съчетани с данни за клинично приложение, неговите основни фармакокинетични свойства са изяснени, осигурявайки основа за рационално клинично приложение.

Абсорбция: Продуктът се прилага чрез подкожна микроинжекция в повърхностната подкожна тъкан около целевите лицеви мускули. Той може бързо да се абсорбира от локалните тъкани с по-висока бионаличност от локалните форми.

Ефективната локална тъканна концентрация се достига в рамките на 1-2 часа след инжектирането, а пиковата плазмена концентрация се появява след 4-6 часа. Степента на абсорбция е в положителна корелация с дозата на инжектиране: ниската доза (50 ug/място) показва лека абсорбция, докато високата доза (100 ug/място) има малко по-бърза скорост на абсорбция, без резки скокове на плазмената концентрация, което гарантира висока безопасност. Поради голямото си молекулно тегло, той не може лесно да проникне през непокътнатия рогов слой, което прави подкожната микроинжекция основният ефективен начин на приложение, за да се избегне недостатъчна абсорбция при локално приложение.

Разпределение: След инжектиране LC553 се разпределя главно в кожните тъкани и мускулите около мястото на инжектиране с ограничено системно разпределение и малък обем на разпределение. Той почти не преминава кръвно{2}}мозъчната бариера и плацентарната бариера без видимо системно натрупване.

Метаболизъм: Разгражда се главно от пептидази и протеази в местните тъкани при бърз метаболитен процес. Основните метаболити са аминокиселинни фрагменти, които могат да бъдат допълнително усвоени и използвани от тялото без производство на токсични метаболити.

Неговата N{0}}терминална ацетилираща модификация му позволява да устои на разграждането от аминопептидаза до известна степен и да удължи локалното време на действие. Общият му-живот на полуразпад варира от няколко минути до няколко часа, в съответствие с подобни полипептидни лекарства, и е необходимо редовно многократно инжектиране, за да се поддържа ефикасността.

Екскреция: Аминокиселинните фрагменти, произведени чрез метаболизма, се екскретират главно през бъбреците в урината, като малко количество се елиминира чрез жлъчката в чревния тракт. Не се наблюдават явни нарушения на екскрецията. Не е необходимо коригиране на дозата при хора с нормална бъбречна функция и няма данни за натрупване in vivo. Дългосрочното-редовно инжектиране няма да увеличи тежестта на отделянето.