Sephadex G75е вид гел филтър пълнител с добра производителност. Приготвя се чрез омрежване на декстран и епихлорохидрин. Това е гел с форма на топче с голямо количество хидроксилни групи, което е лесно да се набъбне във вода и електролитни разтвори. Максималната граница на изключване на това съединение е 80000, а специфичната степен на подуване зависи от количеството на сухата смола и условията на работа. Например при определени условия степента на подуване на суха смола може да бъде 519ml/g. Когато диапазонът на работно pH е 6.210 (5.210 за някои продукти), съединението може да остане стабилно. Препоръчва се да го съхранявате при стайна температура, хладно и далеч от светлината в температурния диапазон от 430 градуса (или 425 градуса), за да се поддържа неговата работа и стабилност. Това вещество е особено подходящо за големи биомолекули с молекулно тегло, по -голямо от 80000. Използва се главно за обезсоляване и подмяна на буфер на такива големи биомолекули. Чрез една стъпка операция - е възможно бързо да се обезсолявате, да се отстранят замърсителите и да се прехвърлят молекули в нов буферен разтвор. В допълнение към обезсоляването и подмяната на буфера, Sephadex G-75 също е подходящ за процеса на пречистване на големи биомолекули.
 |
 |
Sephadex G75е декстран гел, който се използва главно за технологията за разделяне и пречистване в биохимията и молекулярната биология. Основните употреби на това вещество са следните:
В процеса на обезсоляване той може ефективно да премахне солите (обикновено малки молекулни неорганични соли) от биологични молекулярни разтвори. Предимството на това вещество е, че е лесно да се работи, бързо и може да се постигне ефективно обезсоляване, без да се променя активността на биомолекулите. В допълнение, поради отличната си химическа стабилност и биосъвместимост, той е подходящ за лечение на обезсоляване на различни биомолекули, включително протеини, пептиди, нуклеинови киселини и др. В практически приложения гел -дезалтирането обикновено се комбинира с други пречистващи технологии като йонен обмен, афинитетна хроматография и др., За да се постигне компротивна пречистване и разделяне на биомолекули.
Това вещество има широк спектър от приложения при подмяна на буфер, особено в областта на биохимията и молекулярната биология. Например, в процеса на пречистване на протеини понякога е необходимо да се прехвърлят протеини от една буферна система в друга буферна система, която е по -подходяща за тяхната стабилност и активност. И това вещество може ефективно да постигне тази цел; В процеса на екстракция на нуклеинова киселина също е необходимо да се отдели нуклеиновата киселина от разтвора, съдържащ примеси и соли, и да се прехвърли в нов буфер за последващи операции. Той е приложим и за този сценарий; По време на клетъчната култура понякога е необходимо да се замени културната среда или буфер, за да се поддържа растежът и активността на клетките. Може да се използва за премахване на вредни вещества от стара културална среда или буфери и въвеждане на нови културни носители или буфери.
Молекулярна обсада
При процесите на изследване и подготовка на протеини обикновено е необходимо да се отделят целевите протеини от сложни смеси. Той може да отдели протеини въз основа на техния размер, като по този начин постига пречистване на протеини. Чрез регулиране на условията на елуиране, като йонната якост и рН стойността на елуента, ефективността на разделянето на протеините може да бъде допълнително оптимизирана. В допълнение към протеините и нуклеиновите киселини, той може да се използва и за разделяне и пречистване на други биомолекули, като полизахариди, ензими, антитела и др. Въпреки че това вещество не се използва директно като инструмент за определяне на молекулното тегло, то може да служи като спомагателен инструмент при определяне на молекулното тегло.
В процеса на пречистване на протеина обикновено е необходимо да се отстранят примесите на малки молекули като соли, метаболити на малки молекули, несвързани лиганди и др. От протеиновия разтвор. Това вещество може ефективно да премахне тези малки молекулни примеси от протеинови разтвори, като по този начин подобрява чистотата на протеините. Неговият ефект на молекулярно сито позволява ефективно отстранени тези малки молекулни примеси, което води до по -чисти нуклеинови киселини. Ензимните препарати обикновено съдържат малки молекулни примеси като нереагирали субстрати, инхибитори, метаболити и др. Тези примеси могат да повлияят на активността и стабилността на ензимите. Чрез гел филтрацията на материала тези малки молекулни примеси могат да бъдат ефективно отстранени и чистотата на ензимния приготвяне може да бъде подобрена. В допълнение към протеините и нуклеиновите киселини,
Симулиране на междуклетъчния сигнал трансдукция
Преобразуването на междуклетъчния сигнал е основният регулаторен механизъм на жизнените дейности, включващ сложни процеси като разпознаване на клетки, преобразуване на сигнала и физиологичен отговор. Традиционните изследвания често разчитат на модели на живи клетки, но има ограничения като сложни сигнални мрежи и множество интерфериращи фактори.Sephadex G75е класическа среда за филтриране на гел от декстран. Порестата му структура и ефектът на молекулярното сито осигуряват уникален физически модел за симулиране на междуклетъчен сигнал трансдукция.
Физически модел за симулиране на междуклетъчен сигнал трансдукция с помощта на Sephadex G-75
Симулация на междуклетъчните пролуки кръстовища
Разклонението на Gap е хидрофилен канал, образуван между съседни клетки чрез линкер, което позволява безплатен обмен на малки молекули с молекулно тегло<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Образуване на градиент на сигнални молекули: Различни концентрации на сигнални молекули (като CAMP, CA ²+) се зареждат в геловата колона. Разликата на скоростта на дифузия на малките молекули в гел порите може да се наблюдава чрез ефекта на молекулярното сито и може да се симулира градиентно предаване на химически сигнали между клетките.
Симулация на синергичен отговор: Две взаимодействащи молекули (като лиганд и рецептор) се зареждат съответно в двата края на гел колоната и тяхната свързваща кинетика се анализира чрез разликата във времето на елуиране, за да симулира процеса на молекулно разпознаване в директната контактна комуникация между клетките.
Симулация на молекулен контакт на повърхността на мембраната
Комуникацията между мембранните повърхностни молекули разчита на специфичните взаимодействия на повърхностните протеини на клетъчната мембрана. Sephadex G-75 може да симулира този процес чрез функционална модификация:
Експеримент за свързване на рецепторен лиганд: Биотинилирани рецепторни протеини (като EGFR) са фиксирани на повърхността на гел частици, флуоресцентни белязани лиганди (като EGF) се улавят чрез стрептавидиновата биотинова система, а интензивността на сигнала на лигавицата се следи с флуоресцентно детектор, за да се определи количествено приспособяването на рецепторния лиганд.
Конкурентен анализ на свързване: Предварително зареждане на рецепторния лиганд комплекс в колоната с гел, добавя конкурентни инхибитори на различни концентрации (като анти EGFR антитела), изчислете константата на инхибиране (KI) чрез пиковото изместване на елуирането и симулира ефекта на интервенцията на лекарствата върху клетъчните сигнални пътища.
Симулация на предаване на химичен сигнал
Трандукцията на химичния сигнал разчита на дифузията на химически сигнални молекули (като хормони и цитокини), секретирани от клетки чрез телесни течности или извънклетъчна матрица, за да се насочат към клетките. Sephadex G - 75 може да конструира триизмерен модел на дифузия:
Симулация на паракринната система: Секреторните клетки (като макрофаги) и целевите клетки (като Т клетки) са съответно капсулирани в гел микросфери и състоянието на активиране на целевите клетки (като експресия на CD69) се наблюдава чрез CO културата за симулиране на локалния ефект на паракринните сигнали.
Предаване на ендокринен сигнал: Флуоресцентни белязани хормони (като инсулин) се зареждат в гел колоната и взаимодействието им с гел пори се анализира през времето на елуиране, а половината - животът на хормоните в кръвообращението и разпределението на целевите органи се прогнозира чрез комбиниране на математически модели.
Приложение случай на Sephadex G-75 в изследване на клетъчните сигнали
Изследване на трансдукцията на сигнала на червените кръвни клетки и функцията на интегрина
Интегринът IIB 3 на рецептора на тромбоцитите е най -изобилният гликопротеин на повърхността на тромбоцитната мембрана и е от решаващо значение за образуването на хемостаза и тромб. Проучете използването на Sephadex G-75, за да симулирате взаимодействието между тромбоцитите и субендотелиалния колаген:
Модел на активиране на интегрин: Пречистеният интегрин IIB 3 се фиксира върху повърхността на гел частиците и като лиганд се добавя разтворим фибриноген (FG). Кинетиката на свързване е открита чрез повърхностен плазмонов резонанс (SPR). Установено е, че афинитетът на интегрин към FG след активиране е значително подобрен (KD е намален от μm до nm).
Антитромбоцитна лекарствена скрининг: PRELOAD Интегрин FG комплекс в колона с гел, добавете антитромбоцитни лекарства с различни концентрации (като тирофибан), изчислете скоростта на инхибиране на лекарствата върху активността на интегрина чрез елуиране на пиково изместване и осигуряване на високо - производителна скринингова платформа за разработване на нови антитромботични лекарства.
Регулиране на сигналните пътища, свързани с тумора
Туморните клетки насърчават пролиферацията и метастазите чрез анормално активиране на сигнални пътища като MAPK и PI3K/Akt. Sephadex G-75 може да се използва за изолиране и пречистване на ключови протеини в сигналните пътища:
Изследване на пътя на сигнала на EGFR: EGFR протеинът се пречиства чрез филтрация на гел Sephadex G-75 и неговият фосфорилиране се анализира чрез масспектрометрия. Установено е, че нивото на фосфорилиране на местата на Y1068 и Y1086 на EGFR е значително увеличено след стимулация на EGF, които активираха сигналите на ERK1/2 и Akt.
Анализ на механизма за резистентност към лекарства: В лекарството - резистентни стомашни ракови клетки (SGC7901/VCR), UHRF1 протеинът се изолира и пречиства от Sephadex G-75 и е установено, че неговата свръхекспресия може да попречи на активирането на апоптоза, свързана с апоптоза (IC ₅ Подобно на каспаза-3), намаляване на химиотерапията на лекарството (IC ₅ Увеличена с каспаза-3), намалява химиотерапията на лекарството (IC.
Сигнализация на имунните клетки и регулиране на полизахарид
Полисахаридите на червените водорасли (BFP) засилват имунния отговор чрез активиране на NF - κ B и MAPK сигнални пътища в макрофагите. Изследване на разделянето и пречистването на BFP и неговите компоненти (F1, F2, F3), използвайки Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% са получени чрез филтрация на гел Sephadex G-75, комбинирана с хроматография на DEAE целулоза 52 йонна обмен, а тяхната молекулярна тежест е съответно 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa и 45 kDa.
Активиране на сигналния път: В модела на макрофага RAW264.7 BFP и неговите компоненти могат значително да предизвикат секрецията на NO и TNF -, а неговият механизъм включва NF - κ B ядрена транслокация и фосфорилиране на jnk, erk, и p38 MAPK. Пречистените компоненти, разделени от Sephadex G - 75, показаха, че F1 има най -силен ефект на активиране върху NF - κ B и MAPK пътища (увеличаване на производството на NO с 2,5 пъти и TNF - секреция от 3 пъти).
Популярни тагове: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, доставчици, производители, фабрика, на едро, купуване, цена, насипно състояние, за продажба