BIS-TRIS буфер CAS 6976-37-0

Това е ефективен биологичен буфер с ефективен диапазон на буфериране на pH от 5,8-7,2 и стойност на pKa от 6,5 (25 градуса). При биохимичните експерименти много биомолекули като протеини и нуклеинови киселини са силно чувствителни към стойностите на pH и дори малки промени в pH могат да повлияят на тяхната структура и функция. BIS-TRIS може да стабилизира стойността на рН на разтвора в този диапазон на рН, осигурявайки стабилна среда за биохимични реакции. В процеса на разделяне и пречистване на протеини естествената конформация на протеина може да се поддържа, за да се предотврати денатурация или утаяване поради промени в рН.

Например, в техники за пречистване на протеини като йонообменна хроматография и афинитетна хроматография, използването наBIS-TRIS буферможе да гарантира, че взаимодействието между протеините и хроматографската среда се осъществява при стабилни условия на рН, като по този начин подобрява ефективността и чистотата на пречистване.

При анализите на ензимната активност, ензимната активност често зависи от конкретна рН среда. Стойността на рН на реакционната система може да се контролира прецизно, за да се даде възможност на ензима да упражнява каталитична активност при оптимални условия на рН, като по този начин се измерва точно активността на ензима. Това е от голямо значение за изучаване на свойствата, механизмите на действие и разработването на ензимни препарати от ензими.

BIS-TRIS има способността да се координира с различни метални йони и да образува стабилни комплекси, като Zn ² ⁺ - BIS-TRIS, Mn ² ⁺ - BIS-TRIS и т.н. Тези комплекси с метални йони играят важна роля в изследването на структурата и функцията на биомолекулите. В структурния анализ на протеините металните йони често действат като кофактори за участие в образуването на активни центрове в протеините. Чрез координиране на BIS-TRIS с метални йони, структурата на протеиновите комплекси с метални йони може да бъде стабилизирана, което улеснява използването на техники като рентгенова кристалография и ядрено-магнитен резонанс (NMR) за структурен анализ.

Например, активните центрове на някои съдържащи цинк ензими изискват цинкови йони, за да поддържат своята каталитична активност, а BIS-TRIS Zn ² ⁺ комплексите могат да осигурят стабилна структурна среда за тези ензими, което помага за точното анализиране на техните три-измерни структури.

При изследвания на нуклеинови киселини, като секвениране на ДНК, металните йони могат също да участват в сгъването и функционалното регулиране на нуклеиновите киселини. Координацията между BIS-TRIS и металните йони може да регулира локалната среда на нуклеиновите киселини, засягайки взаимодействията между нуклеинови киселини и протеини, малки молекули и т.н., осигурявайки мощен инструмент за-задълбочено изследване на структурата и функцията на нуклеиновите киселини.

BIS-TRIS има важни приложения в експерименти с протеинова електрофореза. SDS-PAGE (електрофореза с натриев додецилсулфат с полиакриламиден гел) и Native PAGE (електрофореза с неденатуриращ полиакриламиден гел) са обичайни техники за протеинова електрофореза.BIS-TRIS буферчесто се използва за приготвяне на буфер за електрофореза, за да се поддържа стабилността на pH на разтвора по време на електрофореза. В SDS-PAGE протеините се денатурират и отрицателно зареждат в буфер за проба, съдържащ SDS и меркаптоетанол, и след това се разделят по размер на молекулите в полиакриламиден гел.

Той може да гарантира стабилността на рН стойността на буфера за електрофореза, позволявайки на протеините да мигрират по очаквания начин в електрическо поле, като по този начин точно разделят протеините с различни молекулни тегла и откриват относителните им молекулни тегла.

В Native PAGE протеините поддържат естествената си конформация за електрофоретично разделяне. Използването му може да предотврати денатурацията на протеини поради промени в pH, да запази естествената активност и конформационната информация на протеините и да помогне за изучаването на естественото състояние и взаимодействията на протеините.

Western blotting е важна експериментална техника, използвана за откриване на нивото на експресия на целевите протеини. Bis Tris пропановият буфер често се използва като протеинов транспортен буфер в имуноблотинг експерименти.

По време на прехвърлянето на протеин от гела към мембраната, Bis Tris пропановият буфер може да поддържа стабилно рН среда, гарантирайки, че протеинът се прехвърля към мембраната с правилна конформация и зарядно състояние. Това е от решаващо значение за последващо свързване на антитела и откриване на сигнала.

Ако протеините претърпят денатурация или конформационни промени по време на процеса на прехвърляне, това може да доведе до невъзможност на антителата да разпознаят точно целевия протеин, като по този начин повлияе на точността на експерименталните резултати. Поради това пропановият буфер Bis Tris играе решаваща роля в експериментите с имуноблотинг, като спомага за подобряване на чувствителността и надеждността на експериментите.

Клетъчната култура е важна технология в биомедицинските изследвания и стойността на pH на средата за клетъчна култура има значително влияние върху клетъчния растеж и метаболизма. BIS-TRIS пропановият буфер може да се използва за приготвяне на среда за клетъчна култура за поддържане на стабилна стойност на pH по време на процеса на клетъчна култура.

Различните видове клетки имат различни изисквания за рН, но обикновено изискват растеж в среда, близка до физиологичното рН (приблизително 7,2-7,4).

Пропановият буфер BIS-TRIS може да буферира промените в рН на културалната среда по време на култивиране на клетките, да предотврати флуктуации на рН, причинени от натрупване на метаболитен продукт, обмен на газ и други фактори, и да осигури стабилна среда за растеж на клетките. Това е от голямо значение за нормалния растеж, пролиферация и функционална експресия на клетките, като спомага за подобряване на успеваемостта на клетъчната култура и надеждността на експерименталните резултати.

Електрофорезата на нуклеинова киселина е често използван метод за откриване на дължината и концентрацията на целевите нуклеинови киселини, включително електрофореза на ДНК и РНК. Подходящ за експерименти с електрофореза на нуклеинови киселини, той може да поддържа pH стабилността на буфера за електрофореза.

При електрофорезата на нуклеинова киселина молекулите на нуклеиновата киселина мигрират под действието на електрическо поле въз основа на техния размер и свойства на заряда.

Той може да гарантира стабилността на рН стойността на разтвора по време на електрофореза, позволявайки на молекулите на нуклеиновата киселина да мигрират по очаквания начин, като по този начин точно разделят фрагментите на нуклеинова киселина с различна дължина и откриват техните концентрации. Това е от голямо значение за изследвания като генно клониране, анализ на генната експресия и секвениране на нуклеинова киселина.

BIS-TRIS може също да се използва за откриване на креатинкиназа. Креатин киназата е важен ензим, който играе решаваща роля в мускулния енергиен метаболизъм. Определянето на неговата активност е от голямо значение за диагностика на мускулни заболявания и оценка на спортни травми. В експеримента за откриване на креатинкиназа, стабилността на pH на реакционната система може да се поддържа, за да се гарантира, че ензимът проявява каталитична активност при оптимални условия на pH. Чрез прецизно контролиране на pH стойността, точността и надеждността на измерването на активността на креатин киназата може да бъде подобрена, осигурявайки силна подкрепа за клинична диагностика и изследвания.

BIS-TRIS също играе важна роля в изследването и приложението на хемоглобина. По време на процеса на разделяне на хемоглобина, неговата стабилност и активност могат да се поддържат, за да се предотврати денатурация или агрегация поради промени в pH. Това е от голямо значение за пречистването и изследването на структурата на хемоглобина.

BIS-TRIS може ефективно да защити хемоглобина по време на-процеса на сушене чрез замразяване. Сушенето чрез замразяване е често използван метод за запазване на биологични продукти, но протеините могат да бъдат повредени по време на процеса на замразяване и сушене. Може да осигури стабилна среда за хемоглобина по време на процеса на-сушене чрез замразяване, да намали денатурацията и инактивирането на протеини и да подобри активността и стабилността на хемоглобина след-сушене чрез замразяване.

IEF (изоелектрична фокусираща електрофореза) и 2-D гел електрофореза са често срещани техники в изследването на протеомиката, които се използват за разделяне и анализиране на сложни протеинови смеси. BIS-TRIS може да се използва като катоден електролит за IEF/2-D гел електрофореза.

По време на IEF процеса, протеините мигрират и се фокусират в рН градиент въз основа на тяхната изоелектрична точка. BIS-TRIS католитът може да поддържа pH стабилността на буфера за електрофореза, като гарантира, че протеините могат точно да мигрират към своята изоелектрична точка по време на процеса на изоелектрично фокусиране. При 2-D гел електрофореза, използването наBIS-TRIS буферсъщо така помага за подобряване на ефекта на разделяне и разделянето на протеините, осигурявайки високо{0}}качествени данни за изследване на протеомиката.