Протеиназа К на прах CAS 39450-01-6

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. е един от най-опитните производители и доставчици на протеиназа k на прах cas 39450-01-6 в Китай. Добре дошли в търговията на едро с висококачествена протеиназа k на прах cas 39450-01-6 за продажба тук от нашата фабрика. Предлагат се добро обслужване и разумна цена.

Протеиназа К на прахе високоефективна, не-специфична серинова протеаза, широко използвана в молекулярната биология и биохимия, главно за разграждане на протеини и отстраняване на замърсяващи протеини от препарати на нуклеинова киселина. Извлича се от гъбата Engyodontium album (бивш Tritirachium album) и поддържа своята активност в широк диапазон от температури (20-60 градуса) и pH (4-12), дори когато се инкубира в разтвор, съдържащ SDS (0,5-1%) или урея (4M) при денатуриращи условия.

Ензимът ефективно разгражда широка гама от протеини, включително РНКаза и ДНКаза, чрез разцепване на пептидни връзки (за предпочитане хидролизиране на карбоксилния край на алифатни/ароматни аминокиселини) и следователно се използва за отстраняване на нуклеаза при екстракция на ДНК/РНК, за да се гарантира целостта на нуклеиновата киселина. В допълнение, той обикновено се използва при храносмилането на тъканите (напр. парафин-вградени проби), клетъчен лизис и протеомични изследвания.

Протеиназа К на прах обикновено се доставя в лиофилизирана форма, която е силно стабилна (-20 градуса за дългосрочно съхранение) и трябва да се разтвори в буфер (напр. Tris-HCl, EDTA) преди употреба. Неговата активност зависи от Ca²⁺, но хелатиращи агенти като EDTA само частично инхибират ензимната активност. Саморазграждането трябва да се избягва по време на работа и се препоръчва топлинна инактивация при 65 градуса. Поради силната си способност за хидролизиране на протеини, е необходима внимателна защита, за да се избегне контакт с кожата или лигавицата.

Протеиназа k на прах, известен също като протеиназа К или EC 3.4.21.14, е серинова протеаза, изолирана и пречистена от Tritirachium album Limber. От първото си изолиране от Wolfgang Ebeling et al. през 1974 г. протеиназа К е широко използвана в биохимията, молекулярната биология, медицината и индустрията поради високата си активност и широка субстратна специфичност.

В процеса на екстракция на ДНК и РНК, основната функция на протеиназа К е да разгражда протеини, свързани с нуклеинови киселини, позволявайки на ДНК или РНК да бъдат свободни в разтвор за последваща екстракция и пречистване. Поради своята стабилност и висока активност в денатуриращи агенти като урея и SDS, протеиназа К обикновено се използва за изолиране на плазмиди или геномна ДНК и РНК.

протеиназа К може да инхибира активността на РНКазата и да предпази РНК от разграждане.

1. Екстракция на ДНК и РНК

 

Екстракция на ДНК: Протеаза К може да хидролизира хистони, които се свързват с ДНК, позволявайки на ДНК да се дисоциира в разтвор. Впоследствие примесите бяха отстранени чрез различни методи, като екстракция с фенол и хлороформ, утаяване с етанол и др., и беше събрана пречистена ДНК.
Екстракция на РНК: По време на процеса на екстракция на РНК, РНК ензимите обикновено присъстват в околната среда и самата система от проби може също да съдържа РНК ензими, което прави РНК силно податлива на разграждане. Добавяне на малко количество от

2. Технология на in situ хибридизация

 

В технологията за in situ хибридизация, протеиназа К обикновено се използва за прехибридизационна обработка за смилане на протеини, заобикалящи целевата ДНК, увеличаване на шанса за свързване на сондата с целевата нуклеинова киселина и засилване на хибридизационния сигнал. Все пак трябва да се отбележи, че когато концентрацията на протеиназа К е твърде висока, времето за храносмилане е твърде дълго или температурата на инкубация е твърде висока, това може да причини увреждане на клетъчната структура, водещо до отделяне на тъканни участъци и изчезване на клетъчни ядра, като по този начин повлиява резултатите от хибридизацията. Следователно, в практическите приложения е необходимо да се контролира стриктно концентрацията и времето за лечение на протеиназа К.

3. Инактивиране и дезинфекция на вируси

 

Протеаза К, поради силната си протеолитична активност, може да се използва за инактивиране и дезинфекция на вируси. Изследванията показват, че третирането на чиста вода и битови отпадъчни води с определена концентрация на протеиназа К може ефективно да инактивира вирусите. Протеаза К, като дезинфектант, инактивиращ вируса, може да намали потенциалната вреда, причинена от конвенционалните окислителни химически дезинфектанти на човешкото тяло, а нейното производство и транспортиране са безопасни без необратимо замърсяване на околната среда.

4. Уестърн блотинг и импулсна електрофореза

 

Протеаза К също е широко използвана в подготовката на хромозомна ДНК за импулсна електрофореза, Western blotting и други експерименти. В експериментите с Western blot протеиназа К може да се използва за отстраняване на не-специфични протеини от пробата, подобрявайки специфичността и чувствителността на блотирането. При експерименти с импулсна електрофореза протеиназа К може да разгради протеиновите примеси в ДНК пробите и да подобри ефективността на електрофорезата.

5. Откриване и идентификация на протеини

 

Протеиназа k на прахможе също да се използва за откриване и идентифициране на определени протеини. Например, при изследване на трансмисивна спонгиформна енцефалопатия (TSE), протеиназа К може да се използва за смилане на протеини в проби от мозъчна тъкан и за идентифициране на наличието на прионови протеини чрез откриване на резистентността на патогенни приони към протеиназа К. В допълнение, протеиназа К може да се използва и за експерименти като определяне на локализацията на ензими върху клетъчните мембрани и отстраняване на катионни протеини, свързани с ендотоксини (като напр. лизозим и рибонуклеаза А).

1. Област на медицината

 

Клинична употреба: Протеаза К има определена медицинска стойност в медицината. Например, лечение на лошо храносмилане със стомашна протеаза, лечение на бронхит с кисела протеаза, лечение на васкулит с еластаза и т.н. В допълнение, трипсин, химотрипсин и т.н. също често се използват за пречистване на хирургични гнойни рани и лечение на плеврални серозни сраствания.
Откриване и диагностика на вируси: Протеаза К също има потенциални приложения при откриване и диагностика на вируси. Чрез усвояване на протеините във вирусната проба и излагане на нуклеиновата киселина на вируса, той осигурява удобство за последващо тестване на нуклеинова киселина.

2. Индустриален сектор

 

Кожена промишленост: Протеаза K се използва в кожената промишленост за епилация и омекотяване, което може да спести време и да подобри условията за хигиена на труда.
Текстилна промишленост: Протеаза К може да се използва в текстилната промишленост като дегумиране на коприна.
Хранителна промишленост: Протеаза К може да се използва в хранително-вкусовата промишленост за омекотяване на месо, избистряне на алкохол и др.
Перилен препарат: Перилният препарат с добавка на ензими е нов продукт в перилните препарати. Перилният препарат, съдържащ алкална протеаза, може да премахне петна от кръв и протеинова мръсотия от дрехите. Но когато го използвате, внимавайте да не докосвате кожата, за да избегнете увреждане на протеина на повърхността на кожата и причиняване на алергични реакции като обрив и екзема.

Структурни характеристики

 

Молекулното тегло на протеиназа К е приблизително 28900 далтона (28,9 kDa), а има и литературни съобщения за 29,3 kDa. Неговата аминокиселинна последователност и три-измерна пространствена структура са много подобни на субтилизина от семейството на сериновата протеаза, но има и някои уникални характеристики.

Структура на дисулфидна връзка: Молекулите на протеаза К съдържат дисулфидни връзки, които повишават тяхната стабилност и им позволяват да поддържат активност в широк диапазон на рН и условия на висока температура.
Ca ² ⁺ места на свързване:Протеиназа k на прахсъдържа две Ca ² ⁺ свързващи места, които, макар и далеч от активния център, са от решаващо значение за поддържане на каталитичната активност на ензима. Премахването на Ca ² ⁺ ще доведе до загуба на около 80% от активността на протеаза К, а повторното въвеждане на Ca ² ⁺ може само частично да възстанови нейната активност.
Каталитична триада: Протеаза К има каталитична триада Asp-His69-Ser224, която е ключова структура за нейната хидролитична активност.

Механизъм на действие

 

Протеаза К може преференциално да хидролизира естерни и пептидни връзки в съседство с C-края на хидрофобни аминокиселини, сяра-съдържащи аминокиселини и ароматни аминокиселини, хидролизирайки протеини в къси пептиди. Неговият механизъм на действие включва главно следните стъпки:

Свързване на ензимен субстрат: След като протеаза К се смеси със субстрата, субстратът се свързва с активното място на ензима, образувайки ензимен субстратен комплекс.
Каталитична реакция: Под действието на активния център пептидната връзка на субстрата се хидролизира, за да се образува продукт, отделен от ензима.
Силният ефект на разграждане на протеаза К я прави ключов реагент в различни биохимични реакции, особено в процесите на екстракция на ДНК и РНК. Протеаза К може ефективно да разгражда протеини, свързани с нуклеинови киселини, да освобождава нуклеинови киселини и да инхибира активността на нуклеазите, намалявайки разграждането на нуклеиновите киселини по време на екстракцията.

Протеиназа k на прах, като силно активна и специфична за субстрата серинова протеаза, има широк спектър от приложения в биохимията, молекулярната биология, медицината и индустрията. Може да разгражда протеини, които се свързват с нуклеинови киселини и освобождават нуклеинови киселини; Увеличете възможността сондите да се свързват с таргетни нуклеинови киселини в in situ хибридизираща технология; Използва се за инактивиране на вируси и дезинфекция; Отстраняване на протеинови примеси в експерименти с Western blot и импулсна електрофореза; Има лечебна стойност в областта на медицината; Използва се в индустриални области като обработка на кожа, текстилна промишленост, хранително-вкусова промишленост и производство на перилни препарати. Въпреки това, когато се използва протеиназа К, трябва да се обърне внимание на метода на съхранение и условията на употреба, за да се гарантира нейната стабилност и активност.

Протеиназа К е широко{0}}спектърна серинова протеаза, широко използвана в молекулярната биология, биохимията и медицинските изследвания поради своите уникални ензимни свойства и стабилност. Като лиофилизирана прахообразна-форма, Proteinase K Powder играе решаваща роля в експерименти като екстракция на нуклеинова киселина, разграждане на протеини и хомогенизиране на тъкани. Въпреки това, използването на всеки биологичен реагент е свързано с потенциални рискове и неговите неблагоприятни реакции могат да засегнат здравето на операторите и безопасността на експерименталната среда.

Популярни тагове: протеиназа k на прах cas 39450-01-6, доставчици, производители, фабрика, търговия на едро, купуване, цена, насипно състояние, за продажба