Собствениците на домашни любимци често се чувстват объркани от медицинските термини, използвани, когато техният ветеринар им каже, че котката им има котешки инфекциозен перитонит (FIP). Ако знаете какGS-441524 инжекцияработи на химическо ниво, можете да преминете от тревожност към увереност. Това антивирусно лекарство промени начина, по който се лекува FIP, защото е насочено към ензима РНК полимераза, който вирусите използват, за да се копират. Начинът, по който работи това новаторско лекарство, ни показва интересни неща за съвременната ветеринарно-фармацевтична наука.
GS-441524 Инжекция
1. Обща спецификация (на склад)
(1) Инжектиране
20 mg, 6 ml; 30 mg, 8 ml; 40 мг, 10 мл
(2) Таблет
25/45/60/70 мг
(3) API (чист прах)
(4) Машина за пресоване на хапчета
https://www.achievechem.com/pill-преса
2. Персонализиране:
Ще преговаряме индивидуално, OEM/ODM, без марка, само за научни изследвания.
Вътрешен код: BM-3-001
GS-441524 CAS 1191237-69-0
Анализ: HPLC, LC-MS, HNMR
Технологична поддръжка: R&D Dept.-4
Основен пазар: САЩ, Австралия, Бразилия, Япония, Германия, Индонезия, Великобритания, Нова Зеландия, Канада и др.
Ние предлагаме инжекция GS-441524, моля, вижте следния уебсайт за подробни спецификации и информация за продукта.
Продукт:https://www.bloomtechz.com/oem-odm/injection/gs-441524-injection.html
Как инжектирането на GS-441524 инхибира активността на вирусната РНК полимераза при котешки коронавирус?
Разбиране на машината за вирусна репликация
За да се репликира в засегнатите клетки, котешкият коронавирус се нуждае от специфичен ензим, известен като РНК-зависима РНК полимераза (RdRP). Тази молекулярна машина чете генетичния код на вируса и прави нови копия на РНК на вируса. За да направи повече копия от себе си или да се разпространи в здрави клетки, коронавирусът се нуждае от RdRP, за да работи. Ензимът добавя нуклеотиди един по един, за да създаде нови вирусни геноми, работейки като биологична машина за копиране.
Изследователите са открили, че инжектирането на GS-441524 се възползва от основен недостатък в този процес на копиране. Нуклеозидните аналози са вид антивирусен химикал, в който е и този. Тези молекули приличат много на естествените градивни елементи, които RdRP обикновено използва, за да направи вирусна РНК. Когато ензимът попадне на междинни продукти GS-441524 вместо реални нуклеотиди, той ги добавя към нарастващата РНК верига. Това е молекулярен случай на погрешна идентичност, който има много лоши резултати.
Механизъм на конкурентно инхибиране
Когато инжекцията GS-441524 попадне в клетките на болни котки, тя започва да действа като лекарство. Чрез процеси на фосфорилиране клетъчните ензими променят лекарството в неговата активна трифосфатна форма. Естественият аденозин трифосфат (АТФ) и този активен метаболит се опитват да се свържат с ензима RdRP на вируса. GS-441524 трифосфатът може да подмами вирусната машина, защото структурата му е подобна на тази на истинските ATP молекули.
Клиничните тестове върху котки, на които е дадено това лечение, показват, че вирусният товар е намалял значително. По-високите количества от антивирусния агент правят по-вероятно RdRP да абсорбира лекарствената молекула вместо естествените нуклеотиди. Това се нарича конкурентно инхибиране. Ето защо правилната доза-обикновено между 5 и 7 милиграма на килограм телесно тегло-е толкова важна, за да подейства лечението. Ветеринарните специалисти са забелязали, че редовното дозиране поддържа нивата на лекарството в клетките достатъчно високи, за да победят естествените субстрати.
Афинитет на свързване и молекулярно разпознаване
Има специфични места за откриване на вирусния ензим RdRP, които намират правилните нуклеотиди чрез използване на модели на водородни връзки и съвпадение на формата. Химическите характеристики на трифосфата GS-441524 са достатъчно сходни с тези, за да преминат първия ензимен тест. Химическата структура на лекарството е променена по начини, които му позволяват да навлезе в клетките и да работи, като същевременно е съвместим с активното място на вирусната полимераза.
Учените са открили, че променената рибозна захарна част на GS-441524 е много важна. Поради тази структурна характеристика, химикалът може да избегне частите от клетките, които обикновено се отърват от чужди нуклеотиди. Молекулата има свързващи свойства, които са подобни на естествения аденозин трифосфат, след като бъде превърнат в трифосфатна форма. Каталитичният регион на ензима поема фалшивата молекула, което завършва процеса на възпроизвеждане.
GS-441524 Инжектиране и прекратяване на процеса на репликация на вирусен геном обяснен
Събития за прекъсване на веригата
След като вирусният ензим RdRP добави GS-441524 трифосфат към разширяващата се РНК верига, репликацията достига химическа пречка. В лекарствения продукт липсва химическата група, за да се свърже със следващия нуклеотид. Този структурен дефект създава "задължителния терминатор на веригата" на биохимиците. Тъй като механизмът за създаване на РНК на вируса спира да работи, неговият геном не може да се разшири.
Ефектът на прекъсване работи ефективно, тъй като промененият рибозен участък предотвратява-растящата фосфодиестерна връзка във веригата. Естественият синтез на РНК изисква хидроксилна група, която може да се свърже с фосфата на следващия нуклеотид. Вирусните РНК молекули GS-441524 нямат това решаващо химическо наименование. Тъй като е свързан с РНК верига, която не може да завърши, полимеразният ензим образува неефективен комплекс.
Когато котките се лекуват, ветеринарните лекари могат да забележат значителни клинични подобрения от този ефект на прекъсване на веригата. Броят на инфекциозните частици спада драстично, когато репликацията на вирусния геном приключи. Забавянето на производството на вируси помага на имунната система да се бори с болестите. Треската, липсата на апетит и натрупването на течности намаляват с намаляването на вирусния товар.
Характеристики на забавено прекъсване на веригата
GS-441524 има качествата, които експертите наричат „забавено прекратяване“, които са различни от някои антивирусни лекарства, които спират репликацията веднага. След добавяне на лекарствената молекула, вирусът RdRP може да добави още няколко нуклеотида, преди репликацията да спре завинаги. Процесивността на ензима-силата му да ускорява повече от една реакция, без да освобождава матрицата на РНК – обяснява защо този ефект отнема повече време, за да се случи.
Процесът на забавен край е полезен за терапията. Премахването на този натиск може да доведе до промени във вирусите, които ги правят по-малко вероятно да причинят проблеми. Заразените клетки могат също така да завършат нормалните си жизнени цикли, без да се налага да преминават през бързи стресови реакции, тъй като вирусната репликация спира бавно. За да получите дълготрайни-антивирусни ползи, клиничните методи, които поддържат плазмените концентрации на веществото постоянни, като го поставят под кожата всеки ден, използват този процес.
Въздействие върху сглобяването на вирусни частици
Коронавирусът преминава през няколко етапа в своя жизнен цикъл. Пълната репликация на вирусния геном е само един от тях. Някои частични нишки на РНК може да не завършат напълно, но те все още не са полезни за създаване на инфекциозни частици. За да могат вирусите да съберат протеини, те се нуждаят от пълна{3}}геномна РНК, която съдържа цялата им генетична информация. Скъсените РНК части, които се правят, когато GS-441524 разкъса веригата, не могат да кажат на клетката да направи пълни вириони.
Изследователи, които са изследвали групи от лекувани котки, са открили, че количеството на вируса в тяхната кръв и течности намалява в продължение на 12 или повече седмици лечение. Този бавен спад се причинява както от спиране на директното производство на нова вирусна РНК, така и от нормалното отстраняване на увредените вирусни частици. Котките обикновено се подобряват в рамките на няколко дни след началото на лечението, но за да изчезне напълно вирусът, лечението трябва да продължи по-дълго, за да стигне до клетките, които все още са заразени.
Какво се случва на молекулярно ниво, когато инжектирането на GS-441524 е насочено към синтеза на РНК?
Клетъчно поемане и каскада на фосфорилиране
ПодкожнатаGS-441524 инжекцияпретърпява много метаболитни модификации, преди да има антивирусен ефект. Веднъж попаднал в кръвообращението, материалът се придвижва до всички области на тялото, включително перитонеални повърхности, лимфни възли и паренхим на органи, където вирусите се размножават. Транспортерите на клетъчната мембрана откриват нуклеозидната структура и й помагат да навлезе в цитоплазмата.
Веднъж попаднал в клетките, GS-441524 претърпява фосфорилиране, за да се превърне в лекарствено активна трифосфатна форма. Добавянето на фосфатни групи една по една от клетъчните киназни ензими създава монофосфатни и дифосфатни междинни съединения. Той активира както заразените, така и здравите клетки, но антивирусният ефект се проявява само докато вирусът се размножава.
Ефикасността на фосфорилирането влияе върху терапевтичната ефикасност. Количеството на ензима киназа, произвеждан от котки, може да повлияе на това колко скоро започват да действат лекарствата. Това метаболитно разнообразие помага да се обясни защо някои индивиди реагират по-бързо на терапията. Ветеринарните стандарти коригират дозите въз основа на лабораторен мониторинг и клиничен отговор, за да отчетат фармакокинетичните вариации.
Динамика на вътреклетъчния нуклеотиден пул
Концентрационното съотношение на активния GS-441524 трифосфат към естествените нуклеотидни трифосфати определя дали дадено лекарство е интегрирано във вирусната РНК. Заразените клетки съхраняват много естествен АТФ и други нуклеотиди за физиологични функции. Антивирусните агенти трябва да навлязат в клетките на големи нива, за да се борят с естествените субстрати.
Фармакокинетичните проучвания разкриват, че дневната доза поддържа нивата на лекарството в клетките за 24 часа. Тъй като фосфорилираните молекули се намират в клетките, този процес продължава дълго. Поради толкова много отрицателни заряди, трифосфатната форма остава в клетките по-дълго от основната молекула, която се движи бързо през плазмата. Ефикасността на лечението може да се поддържа с веднъж-дневна доза, тъй като тя поддържа клетките живи.
Молекулярно разпознаване чрез вирусна полимераза
GS-441524 трифосфат и RdRP на вируса взаимодействат молекулярно по различни начини. Активното място на ензима съдържа аминокиселинни остатъци, които създават водородни връзки с нуклеотидни целеви атоми. Той отговаря на адекватни критерии за откриване, за да остави остатъците от лекарството вътре в каталитичния център.
Структурната основа за молекулярната мимикрия е установена чрез кристалографски изследвания на подобни вирусни полимерази, комплексирани с инхибитори на нуклеозидни аналози. Основата на GS-441524 трифосфат съвпада с естествените пурини, което позволява сдвояване на Watson-Crick с шаблонната РНК верига. Променената рибозна част се свързва с ензима въпреки неговата структура. Първоначалното приемане на полимераза се дължи на този молекулярен маскарад.
Катализата-добавянето на следващия нуклеотид-е ключовата разлика. Функцията на ензима разчита на 3' края на атомната форма на развиващата се верига. Добавянето на остатъци от GS-441524 прави тяхната структура достатъчно нестабилна, за да инхибира катализата. Полимеразата може да опита многобройни каталитични цикли без успех, преди да се откъсне от шаблона или да остане в неактивен комплекс.
GS-441524 Роля на инжектиране при блокиране на удължаването на нуклеотидната верига при вирусна репликация
Механизъм за задържане на удължението
Производството на РНК във вирусите се случва на кръгове, където полимеразата добавя един нуклеотид наведнъж към 3'-края на нарастващата верига. Всяко добавяне включва крайната хидроксилна група, атакуваща алфа фосфата на новия нуклеотид по нуклеофилен начин. По време на този процес се създава нова фосфодиестерна връзка, която също освобождава пирофосфат. След като се придвижи по шаблона, ензимът поставя следващия шаблонен нуклеотид в активното място.
Променената рибозна захар няма правилно поставената 3' хидроксилна група за следващия цикъл на удължаване следGS-441524 инжекциясе добавя. Химическата промяна прави малка, но важна промяна в структурата. Ензимът полимераза се подготвя за следващия каталитичен цикъл, но не може да намери необходимата химична група, защото липсва или не е ориентиран правилно. В този момент машината за удължаване спира да работи, така че удължаването на веригата не може да се случи.
Кинетични параметри на инхибиране на удължаването на веригата
Лабораторни тестове с чисти вирусни RdRP ензими показват, че този блок за удължаване работи директно. Процесите произвеждат РНК с определени дължини с помощта на РНК матрици, ензими и GS-441524 трифосфат-съдържащи нуклеотидни смеси. Съкратените продукти завършват там, където са въведени остатъците от лекарството, според анализа. Непълният вирусен геном е заключен от свързването на ензима, но не и от катализа.
Динамичните променливи влияят на ефективността на блокиране на разширение. Предпочитанието на ензима към GS-441524 трифосфат пред обикновените нуклеотиди влияе върху неговото включване. Колко бързо ензимът се освобождава от уловените комплекси засяга резултатите. Колко устойчив е остатъкът от лекарството определя дали отстраняването или възстановяването може да премахне инхибирането.
Биохимичните експерименти показват, че вирусният RdRP предпочита GS-441524 трифосфат и го включва в нива, еквивалентни на естествените субстрати, когато се конкурира. Веднъж въведени, остатъците от лекарството трудно се отстраняват. Корекцията чрез вирусни полимерази може да изтрие определени нуклеозидни аналози, но не и GS-441524 остатъци. Тази устойчивост на отстраняване прави молекулата добро лекарство.
Антивирусните ефекти се засилват от забавеното отцепване на спрени полимеразни комплекси от лекарствено{0}}терминирани РНК вериги. Плътно свързаните, но неактивни полимеразни молекули не могат да завършат тази РНК верига или да генерират нови вирусни геноми. Спирането на производството и улавянето на ензимни молекули засилва терапевтичното въздействие отвъд намаляването на конкуренцията.
Стъпка{0}}по-Ензимно разрушаване, причинено от инжектиране на GS-441524 при лечение с FIP
Първоначално свързване и избор на субстрат
Когато вирусният RdRP се натъкне на нуклеотидния пул в заразена котешка клетка, започва ензимно разрушаване. Ензимът за момент се прилепва към нуклеотидните трифосфати по време на избора на субстрат. Остатъците от активно място на полимеразата идентифицират компонентите на субстратната основа, захарта и трифосфата. Инжекционният трифосфат GS-441524 преминава тези първи процеси на разпознаване без проблем.
Основното -сдвояване между шаблона и входящия нуклеотид е ключовият филтър за уникалност. Шаблонните пурини включват аденин и гуанин. Полимеразата избира пурин трифосфат. Поради аденозин-подобната си базова структура, GS-441524 трифосфатът може да се конкурира с естествения АТФ за шаблонен точков аденин. Базовите двойки Watson-Crick се създават между шаблона и субстрата от ензима. Тези връзки се правят добре от GS-441524 трифосфат.
Други елементи за разпознаване включват контакти на ензим-рибоза захарна молекула.GS-441524 инжекцияпроменената рибозна част е структурно подобна на нативната рибоза достатъчно, за да генерира връзки за разпознаване. Три-фосфатни опашки навлизат в ензимни петна, където металните йонни кофактори помагат на фосфатните групи да останат заедно. Алфа фосфатът се подготвя за нуклеофилна атака по време на катализа. GS-441524 трифосфатът отговаря на първоначалните геометрични изисквания за свързване и позициониране.
Етап на каталитично включване
След свързване и позициониране ензимът полимераза катализира нова фосфодиестерна връзка. Основните жизнени дейности включват нуклеотиди, които се свързват, за да образуват полинуклеотидни вериги. Нарастващата верига 3' хидроксилна група атакува пристигащия нуклеотид алфа фосфат. Ензимът поддържа преходното състояние стабилно чрез точно подреждане на метални йони и каталитични остатъци.
Този химичен процес работи за GS-441524 трифосфат. Молекулата носи трифосфатната група за нуклеофилна атака. Молекулата на лекарството и разширяващата се РНК верига образуват фосфодиестерна връзка, след като пирофосфатът се освободи. Интегрирането сега е като естествен нуклеотид. Ензимите добавят лекарствен продукт към вирусната РНК.
Динамика на комплекса след-учредяване
Интегрирането на молекулата разкрива ключовата разлика в химичната структура. След свързване с РНК веригата чрез нейната 5' рибозна захар, на 3' позиция липсва хидроксилната група, от която се нуждае, за да служи като нуклеофил в следващия цикъл на удължаване. Тази част е умишлено пропусната, което прави GS-441524 отличен терминатор на веригата. Ензимът неволно умъртви вирусната ДНК.
Полимеразата се опитва да продължи удължаването след добавяне на GS-441524. Докато ензимът се движи по шаблона, новодобавеният лекарствен остатък се връща в първоначалната си позиция. 3'-краят трябва да е готов за следващия нуклеотид след това преместване. Като използвате следващото местоположение на шаблона, примери за полимераза, изберете подходящия допълнителен субстрат.
Клетъчни и системни последствия
Дали полимеразата се разпада или остава заедно, засяга биологията. Разделянето на вирусни РНК вериги оставя непълен сегмент, който не може да бъде преведен или опакован във вириони. Постоянното свързване на ензимната молекула намалява вирус-репликиращата полимераза в клетките. И двата резултата засилват антивирусната активност. Тези генетични модификации в милиарди заразени клетки са от полза за лекуваните котки.
Отрязването-на вирусни РНК фрагменти и отсъствието на функциониращи полимеразни единици пречат на размножаването на вируса в клетките. Вместо хиляди вирусни частици, заразените клетки създават няколко непълни или неправилно функциониращи вириони. Заразените клетки са по-склонни да бъдат намерени и убити от клетъчния защитен отговор, преди да се размножат.
Лечението намалява вирусите в кръвта, течностите и тъканите. Ветеринарите наблюдават показатели като съотношението албумин-към-глобулин в кръвта и протеини в острата фаза, за да оценят дадено лекарство. Лечението обикновено подобрява температурата, загубата на тегло и натрупването на течност в белите дробове през първите няколко седмици. Разграждането на вирусни частици и заразени клетки отнема време, тъй като те се намират в отделни тъканни хранилища.
Заключение
Начинът, по койтоGS-441524 инжекциябори се с вируса РНК полимеразата е красив пример за молекулярна точност. Този нуклеозиден аналог се възползва от факта, че е необходима правилна нуклеотидна диференциация за вирусна репликация. Веществото специално спира производството на вирусни геноми, като действа като естествени градивни елементи и добавя модификация, която-завършва веригата. Състезаващото се инхибиране, забавеното прекратяване и устойчивите качества на изрязване работят заедно, за да направят силни антивирусни ефекти, които превърнаха FIP от болест, която би ви убила, в такава, която може да бъде лекувана.
Ветеринарите и собствениците на домашни любимци могат да разберат по-добре научната сложност и терапевтичните обещания на тази новаторска техника, ако разберат тези молекулярни събития. Успехът на съединението при лечението на котешки коронавирусни инфекции доведе до повече проучвания за това как може да се използва за лечение на други РНК вируси, което може да има по-голям ефект върху здравето на хората и животните.
ЧЗВ
1. Колко време отнема GS-441524, за да покаже подобрение при котки с FIP?
+
-
Повечето котки, които получават GS-441524, се чувстват по-добре в рамките на 3-7 дни. Хората обикновено се чувстват гладни, след като треската спадне през първата седмица. След една до две седмици изливите започват да намаляват, въпреки че може да отнеме много седмици лечение, за да се елиминират. Албуминът и възпалителните показатели се нормализират за седмици до месеци. Пълните цикли на лечение отнемат 12 седмици или повече за елиминиране и предотвратяване на инфекцията. За да наблюдават развитието им и да коригират режима на лечение, собствениците на домашни любимци трябва често да посещават ветеринарния лекар.
2. Може ли инжекцията GS-441524 да причини резистентност при котешки коронавирус?
+
-
Резистентността на вируса към GS-441524 е необичайна в сравнение с други антивирусни средства. Като терминатор на веригата, химикалът пречи на толерантността. Мутациите, които предотвратяват включването на лекарства, също затрудняват полимеразата да използва естествените нуклеотиди, намалявайки вирусната годност. Неуспехът на лечението обикновено се причинява от неправилно дозиране, неадекватна абсорбция на лекарството или преждевременно прекратяване на лечението, а не от вирусна резистентност. Поддържането на терапевтични дози за препоръчаното време намалява риска от резистентност. Котките, които имат рецидив след първия отговор, трябва да получат допълнителна терапия, вместо да приемат, че са резистентни.
3. GS-441524 има ли приложения извън лечението на котешки коронавирус?
+
-
Допълнително проучване показа, че GS-441524 може да се бори с няколко РНК вируса. Лабораторните тестове показват, че действа срещу кучешки коронавирус, човешки коронавируси (включително SARS-CoV-2) и котешки вируси. Remdesivir, основната молекула на съединението, беше одобрена за лечение на COVID-19 при хора, което доказва неговата ефикасност. Тези подходи се изследват за лечение на допълнителни коронавирусни инфекции при животни и може би други разстройства на РНК вируса. Ефикасността на съединението срещу котешкия коронавирус доказва, че нуклеозидните аналози могат да лекуват животни. Това доведе до разработването на сравними лекарства за различни вирусни заболявания при домашни любимци и говеда.
Партньор с BLOOM TECH-Вашият доверен доставчик на GS-441524 инжекция
Разбиране на молекулярния механизъм наGS-441524 инжекцияпредставлява само началото. Превръщането на това знание в терапевтичен успех изисква достъп до съединения с фармацевтичен-клас от надеждни източници. BLOOM TECH е вашият специализиран доставчик на GS-441524 инжекции, внасяйки над 12 години експертен опит в органичния синтез във ветеринарния фармацевтичен сектор. Нашите GMP-сертифицирани производствени съоръжения отговарят на международните стандарти, включително регулаторните изисквания на FDA на САЩ, ЕС и Япония. Поддържаме строг контрол на качеството чрез три{9}}анализ-фабрични тестове, вътрешен QA/QC преглед и независима проверка от трета страна от органи, одобрени от професионални китайски агенции.
Нашият ангажимент се простира отвъд доставката на продукти до цялостна поддръжка, включително точна документация за митническо освобождаване и прозрачни ценови структури, предназначени за дългосрочни-партньорства. Независимо дали представлявате фармацевтични изследователски институции, ветеринарни клиники или дистрибутори на специализирани химикали, изискващи постоянни доставки на високо-чистота GS-441524, нашият екип предоставя технически експертен опит и надеждна логистика. Свържете се с нашите специалисти, за да обсъдите вашите специфични изисквания и да откриете как протоколите за осигуряване на качеството на BLOOM TECH гарантират, че всяка партида отговаря на точните стандарти, изисквани от вашите приложения. Свържете се с нас днес на Sales@bloomtechz.com, за да проучите възможностите за партньорство.
Референции
1. Мърфи Б. Г., Перон М, Мураками Е, Бауер К, Парк Y, Eckstrand C, Liepnieks M, Pedersen NC. Нуклеозидният аналог GS-441524 силно инхибира вируса на котешки инфекциозен перитонит (FIP) в тъканни култури и експериментални проучвания за инфекции на котки. Ветеринарна микробиология. 2018;219:226-233.
2. Pedersen NC, Perron M, Bannasch M, Montgomery E, Murakami E, Liepnieks M, Liu H. Ефикасност и безопасност на нуклеозидния аналог GS-441524 за лечение на котки с естествен котешки инфекциозен перитонит. Journal of Feline Medicine and Surgery. 2019;21(4):271-281.
3. Warren TK, Jordan R, Lo MK, Ray AS, Mackman RL, Soloveva V, Siegel D, Perron M, Bannister R, Hui HC, Larson N. Терапевтична ефикасност на малката молекула GS-5734 срещу вируса Ebola при маймуни резус. Nature. 2016;531(7594):381-385.
4. Siegel D, Hui HC, Doerffler E, Clarke MO, Chun K, Zhang L, Neville S, Carra E, Lew W, Ross B, Wang Q. Откриване и синтез на фосфорамидатно пролекарство на пироло[2,1-f][триазин-4-амино] аденин С-нуклеозид (GS-5734) за лечение на Ебола и нововъзникващи вируси. Journal of Medicinal Chemistry. 2017;60(5):1648-1661.
5. Tchesnokov EP, Feng JY, Porter DP, Götte M. Механизъм на инхибиране на РНК-зависимата РНК полимераза на вируса Ебола от ремдезивир. Вируси. 2019;11(4):326.
6. Gordon CJ, Tchesnokov EP, Woolner E, Perry JK, Feng JY, Porter DP, Götte M. Remdesivir е директно -действащ антивирусен препарат, който инхибира РНК-зависимата РНК полимераза от тежък остър респираторен синдром коронавирус 2 с висока ефективност. Journal of Biological Chemistry. 2020;295(20):6785-6797.