Ретатрутид(връзка:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) е химически синтезиран дългодействащ GLP-1R/GIPR/GCGR полипептиден агонист, който е предназначен за лечение на диабет тип 2 при възрастни, регулиране на теглото и неалкохолен мастен черен дроб/неалкохолен стеатохепатит. Индикацията за диабет тип 2 при възрастни на този продукт е одобрена за клинична употреба на 29 август 2023 г. В допълнение, заявлението за клинична регистрация на показания за неалкохолен мастен черен дроб/неалкохолен стеатохепатит е в етап на финален преглед. Има осем агонисти на GLP-1R/GIPR/GCGR, които се разработват в света, от които Retatrutide на Rita постигна най-бърз напредък и стартира третата фаза на клинично изпитване през юни тази година. През същия месец Рита обяви, че на годишната среща на ADA са публикувани данните от изследването на втората фаза на ретатрутид, което показва, че на 24 седмици ретатрутид (1 mg, 4 mg, 8 mg или 12 mg) е достигнал основната крайна точка на ефикасност оценка за участници със затлъстяване или наднормено тегло без диабет, със средна загуба на тегло от 17,5%. Сред вторичните крайни точки е постигната средна загуба на тегло от 24,2% в края на 48-седмично лечение. Ние също така синтезирахме пептида в лабораторията въз основа на публикувания метод. Конкретният метод на синтез ще бъде описан накратко и конкретните стъпки могат да ни бъдат изпратени по имейл.
Метод 1:
Подробните стъпки за синтезиране на Retarutide с помощта на синтез в твърдо състояние в лабораторията са както следва:
Подгответе необходимите реагенти и инструменти: включително аминокиселини, дихлорометан, калиев карбонат, етоксилиран силикагел, ацетонитрил, пиридин, N-метилморфолин, източник на диизопропилетил хлорид, трифлуорооцетна киселина, DIPEA, Boc защитени аминокиселини и други реагенти, както и магнитни бъркалки , ротационни изпарители и други инструменти.
(1) Синтез на Boc защитени аминокиселини: Разтворете необходимите аминокиселини в дихлорометан, добавете калиев карбонат на прах, разбъркайте равномерно, добавете етоксилиран силикагел, продължете да разбърквате и след това добавете пиридин и N-метилморфолин, за да получите Boc защитени аминокиселини.
(2) Синтез на твърда фаза: Смесете заедно ацетонитрил, източник на диизопропилетил хлорид и трифлуорооцетна киселина, разбъркайте равномерно, добавете приготвени Boc защитени аминокиселини и продължете да разбърквате, за да получите продукта от синтеза на твърда фаза.
(3) Група за премахване на защитата: Разтворете твърдофазния синтез в дихлорометан, добавете трифлуорооцетна киселина, разбъркайте равномерно и след това добавете DIPEA. Продължете да разбърквате, за да получите синтез на твърда фаза без защита.
(4) Пречистване: Разтворете депротектирания синтез на твърда фаза във вода, коригирайте рН до около 9.0 с разтвор на натриев хидроксид, след това коригирайте рН до около 5.0 с оцетна киселина и накрая чистият продукт се утаява с етер.
Метод 2:
Подробните стъпки за синтезиране на ретарутид чрез синтез на течна фаза в лабораторията са както следва:
Подгответе необходимите реагенти и инструменти: включително аргинин, глицин, оцетен анхидрид, триетиламин, калиев карбонат, дихлорометан, метанол, пиридин, N-метилморфолин, оцетен анхидрид, натриев ацетат и други реагенти, както и инструменти като бъркалки, разделителни фунии, вакуумни помпи, пещи и хроматографски колони.
(1) Разтворете аргинин и глицин в подходящо количество дихлорометан, добавете подходящо количество оцетен анхидрид и триетиламин и разбъркайте равномерно с бъркалка.
(2) Прехвърлете разтворената смес във фурна и я загрейте при 80 градуса C за 1 час, за да ацетилирате аминокиселинните остатъци.
(3) Неутрализирайте реагиралия разтвор с калиев карбонат на прах, за да неутрализирате оцетната киселина в разтвора, за да генерирате натриев ацетат, и след това извлечете генерирания пептид с дихлорометан.
(4) Промийте екстрахирания пептиден разтвор с метанол и филтрирайте с вакуумна помпа, за да получите суровия пептид.
(5) Разтворете суровия пептид в подходящо количество пиридин и N-метилморфолин, добавете подходящо количество оцетен анхидрид и натриев ацетат и разбъркайте равномерно с бъркалка.
(5) Филтрирайте реагиралия разтвор с вакуумна помпа, промийте филтърната утайка с метанол и след това филтрирайте с вакуумна помпа, за да получите крайния рестарутид.
Метод 3:
Подробните стъпки за синтезиране на ретарутид с помощта на химически методи в лабораторията са както следва:
Подгответе необходимите реагенти и инструменти: включително аргинин, глицин, оцетен анхидрид, триетиламин, калиев карбонат, дихлорометан, метанол, пиридин, N-метилморфолин, оцетен анхидрид, натриев ацетат и други реагенти, както и инструменти като бъркалки, разделителни фунии, вакуумни помпи, пещи и хроматографски колони.
(1) Разтворете аргинин и глицин в подходящо количество дихлорометан, добавете подходящо количество оцетен анхидрид и триетиламин и разбъркайте равномерно с бъркалка.
(2) Прехвърлете разтворената смес във фурна и я загрейте при 80 градуса C за 1 час, за да ацетилирате аминокиселинните остатъци.
(3) Неутрализирайте реагиралия разтвор с калиев карбонат на прах, за да неутрализирате оцетната киселина в разтвора, за да генерирате натриев ацетат, и след това извлечете генерирания пептид с дихлорометан.
(4) Промийте екстрахирания пептиден разтвор с метанол и филтрирайте с вакуумна помпа, за да получите суровия пептид.
(5) Разтворете суровия пептид в подходящо количество пиридин и N-метилморфолин, добавете подходящо количество оцетен анхидрид и натриев ацетат и разбъркайте равномерно с бъркалка.
(6) Филтрирайте реагиралия разтвор с вакуумна помпа, промийте филтърната утайка с метанол и след това филтрирайте с вакуумна помпа, за да получите крайния рестарутид.
Необходими са множество реакции на органичен синтез, за да се получи целевата молекула. В допълнение, този метод използва множество органични реагенти и сложни работни условия, така че химическият синтез на Rotarutide в лабораторията обикновено не е подходящ за широкомащабно производство или индустриални приложения. За широкомащабно производство или промишлени приложения, по-често използваният метод е да се приготви Rotarutide чрез методи на синтез като биосинтеза или синтез на течна фаза, които са относително малки в лабораторен мащаб, относително лесни за работа и подходящи за приготвяне на малки количества продукти . Ретарутидът, получен чрез тези методи, е подобен или подобен по структура и биологична активност на ретарутида, синтезиран чрез химични методи, но има предимствата на по-висок добив и по-лесно получаване. В същото време те имат и по-добър потенциал за индустриализация и по-широки перспективи за приложение.
Метод 4:
Подробните стъпки за синтезиране на ретарутид с помощта на биологични методи в лабораторията са както следва:
Приготвяне на необходимите гени и реагенти: Вземете плазмиди, съдържащи гена Retatrutide от генната библиотека, трансформирайте плазмидите с реципиентни клетки (като Escherichia coli) и получете инженерни бактерии, съдържащи гена Retatrutide.
(1) Култивиране на инженерни бактерии: При подходящи условия на температура, рН и концентрация на йони използвайте хранителна среда за култивиране на инженерни бактерии, което им позволява да се размножават в големи количества.
(2) Екстракция на Retarutide: Култивираните инженерни бактерии се раздробяват с помощта на трошачка и клетъчните фрагменти се отделят от Retarutide с помощта на методи като ултрафилтрация и утаяване, за да се получи суровият продукт.
(3) Пречистване на ретарутид: Суровият ретарутид се пречиства чрез хроматографска технология за получаване на ретарутид с висока чистота.
Откриване и идентифициране на Rotarutide: Използвайте високоефективна течна хроматография, масспектрометрия, ядрено-магнитен резонанс и други техники за откриване и идентифициране на структурата на пречистения Rotarutide.
Уравнението на химичната реакция за биологичния синтез на Retarutide в лабораторията включва главно химичните реакции по време на процеса на генна експресия, включително две стъпки: транскрипция и транслация.
Транскрипция: Двуверижната ДНК се отваря, като се използва една верига като шаблон за синтезиране на РНК вериги, което изисква участието на РНК полимераза. Уравнението на реакцията е както следва:
Двуверижна ДНК: DNApol → mRNA+DNApol
Превод: Рибозомите се свързват с иРНК, за да синтезират пептидни вериги, процес, който изисква участието на аминокиселини и енергия. Уравнението на реакцията е както следва:
Рибозома+mRNA → Пептидна верига+GDP+Pi+H2O
Пептидна верига+ATP → Пептидна верига+AMP+PPi
Сред тях DNApol представлява ДНК полимераза; MRNA представлява информационна РНК; Рибозомите представляват рибозоми; Пептидните вериги представляват полипептидни вериги; GDP представлява гуанозин дифосфат; Pi представлява неорганична фосфорна киселина; H2O представлява вода; АТФ представлява аденозин трифосфат; AMP представлява аденозин монофосфат; PPi представлява неорганичен пирофосфат. Тези реакции генерират пептидните вериги, необходими за синтеза на ретарутид, които след това се обработват и модифицират в по-късните етапи, за да се получи ретарутид.
Горните са общи методи за синтез на Rotarutide в лаборатория, всеки с различни предимства, недостатъци и обхват на употреба. Лабораторията обикновено използва методи за синтез на течна фаза и синтез на твърда фаза за дребномащабно производство за изследователска и експериментална употреба; Промишленото производство, от друга страна, приема комбинация от биосинтеза и производство на течна/твърда фаза за широкомащабно производство, за да отговори на пазарното търсене. Трябва да се отбележи, че тези методи изискват стриктна оптимизация на условията и контрол на процеса, за да се гарантира качеството и чистотата на крайния продукт.