Тетраметилбензидин CAS 54827-17-7

В областта на клиничната in vitro диагностика, TMB е основният хромогенен субстрат на ензимно-свързания имуносорбентен анализ (ELISA) и основният функционален компонент на огромното мнозинство комплекти за имуноанализ. В сцената на серологично откриване на инфекциозни заболявания комплектите ELISA за скрининг на инфекциозни заболявания като хепатит ВВ, антитела срещу хепатит С и антитела срещу СПИН, базирани на хромогенната система TMB, с изключително нисък фонов цвят и висока чувствителност на откриване, се превърнаха в основната техническа схема за широкомащабен кръвен скрининг в домашни кръвни станции.

Данните за прилагане на местните кръвни станции показват, че минималната граница на откриване на повърхностния антиген на хепатит ВВ може да достигне 0,1 IU/mL с комплекта за кръвен скрининг, използващ TMB като хромогенен субстрат.

В сравнение с традиционната OPD хромогенна система, процентът на фалшиво отрицателните пропуснати диагнози е намален с 90%, като напълно блокира риска от предаване на инфекциозни заболявания, свързани с трансфузия, от източника. При рутинен амбулаторен скрининг на инфекциозни заболявания в третични болници, комплектът ELISA за колориметрична система TMB контролира разликата между партидите на резултатите от откриването в рамките на 5%, удвоява скоростта на откриване в сравнение с традиционните методи и може да завърши високо-тестване на хиляди проби на ден.

Перфектно отговаря на нуждите от ранен скрининг на инфекциозни заболявания при широко{0}}мащабно население. При клиничното откриване на хормони и туморни маркери предимството на високата чувствителност на колориметричната система TMB е допълнително подчертано. При откриването на индикатори за хормони на функцията на щитовидната жлеза като TSH, T3, T4 и т.н., динамичният линеен обхват на развитие на цвета на TMB е три пъти по-широк от традиционните реагенти за проявяване на цвят, които могат точно да покрият пълния диапазон на концентрация от здрави индивиди до пациенти с хипертиреоидизъм и хипотиреоидизъм, избягвайки фалшиви аларми, причинени от ефекти на кука в проби с висока концентрация.

При клиничното откриване на туморни маркери комплектът ELISA, базиран на TMB, може точно да открие туморни маркери като CEA и AFP с концентрация от само няколко ng/mL в серума, осигурявайки надеждни количествени резултати за ранен скрининг и следоперативно проследяване на рецидиви на рак.

Статистическите данни от отдела по патология на третична болница в Китай показват, че степента на откриване на ранни стомашно-чревни тумори с помощта на схемата за откриване на комбинация от колориметрични туморни маркери TMB е с 25% по-висока от традиционните методи. В спомагателния диагностичен сценарий за бързо откриване на антиген на COVID-19, TMB, като основен компонент на ензимното развитие на цвета, различен от метода с колоидно злато.

Прилага се във високо-системата за откриване ELISA за антиген на COVID-19. Чувствителността на откриване е с един порядък по-висока от тази на традиционния метод с колоидно злато, който може да постигне положително откриване в етапа на нисък вирусен товар, което значително намалява процента на пропуснатите диагнози при ранно заразени лица. В поддържащата система на напълно автоматизиран хемилуминесцентен имуноанализ, TMB, като подобрен субстрат за директна хемилуминесценция на пероксидаза от хрян (HRP), може значително да подобри интензитета и стабилността на луминесцентния сигнал, да увеличи съотношението сигнал-към-шум при хемилуминесцентно откриване с 4 пъти и да контролира CV стойността на резултата от откриване в рамките 3%, отговаряйки напълно на изискванията за висока-прецизност на откриване на висок клас напълно автоматизирано оборудване за имуноанализ.

В областта на биологичните изследвания,тетраметилбензидине предпочитаният хромогенен субстрат за маркирани с HRP вторични антитела в Western blot експерименти и е един от най-често използваните хромогенни реагенти в лабораториите по молекулярна биология. В традиционните Western Blot експерименти, използването на ТМВ хемилуминесцентно подобрена колориметрична система може да открие целеви протеини толкова ниско, колкото ниво на pg.

В сравнение с традиционния DAB колориметричен метод, чувствителността на откриване се увеличава с два порядъка и може лесно да идентифицира промените на експресията на протеини на сигналния път с ниско изобилие и транскрипционни фактори в клетките. Сравнителни експериментални данни от биологична лаборатория на местен университет показват, че с помощта на оптимизиран луминесцентен разтвор с висока-чувствителност TMB, времето за разработка на Western Blot е съкратено от традиционните 30 минути до по-малко от 10 секунди, с чисти фонови ленти и без примеси. Две подобни протеинови ленти с разлика в молекулното тегло от само 1 kDa могат да бъдат ясно разграничени, което значително подобрява надеждността на експериментите с протеинов имуноблотинг.

В експерименталните сценарии на имунохистохимията и имунохистохимията, подобрената система за оцветяване с TMB може да генерира стабилни сини неразтворими продукти, да локализира точно позициите на експресия на целевите протеини в тъканни срезове и клетъчни слайдове. В сравнение с традиционното DAB кафяво-жълто оцветяване, сините продукти за оцветяване с TMB формират меко цветово разграничение със синьо-лилавите ядра, оцветени с хематоксилин, без общата дифузия по ръбовете и фоновите не-специфични проблеми с оцветяването на DAB оцветяването. В експериментите за локализиране на протеин на невротрансмитер в нервната тъкан и интерпретация на експресия на протеин PD-L1 в туморна тъкан.

Разпознаването на резултатите от оцветяването с TMB е значително по-добро от традиционните методи за оцветяване, което помага на изследователите да наблюдават по-точно морфологията на протеиновата субклетъчна локализация.

В основния изследователски сценарий за анализ на ензимната активност, TMB е специфичен субстрат за определяне на следи от пероксидазна активност. Въз основа на TMB оксидационна колориметрична спектрофотометрия, HRP ензимната активност с концентрация до 1 ng/mL в пробата може да бъде точно открита. Това е класически експериментален метод за изследване на активността на растителната пероксидаза и микробния антиоксидантен ензим. В челните изследвания на ензимологията на една-молекула имобилизираните TMB молекули могат да генерират локализирани цветни утайки под катализата на единична HRP ензимна молекула.

Пространственото разпределение и каталитичната кинетика на единична ензимна молекула могат да се наблюдават директно чрез оптичен микроскоп, осигурявайки интуитивен метод за наблюдение за основните изследвания на ензимологията на една-молекула. В сценария за откриване на хибридизация на нуклеинова киселина, HRP се маркира върху сондата за нуклеинова киселина и целевата последователност на нуклеинова киселина в пробата се открива количествено чрез интензитета на цвета на TMB. Без необходимост от сложно оборудване за откриване на флуоресценция, може да бъде завършено качествено и количествено откриване на нуклеинова киселина с ниска{3}}цена. Той е широко използван в експерименти за генно типизиране и скрининг на генетично модифицирани компоненти в масови научноизследователски лаборатории.

В областта на мониторинга на околната среда,тетраметилбензидинсе използва широко като високочувствителен окислителен колориметричен реагент за бързо откриване на следи от водороден пероксид и йони на тежки метали във вода. В сценария на тестване за безопасност на питейната вода, колориметричната система за откриване на симулация на пероксидаза, базирана на TMB, може бързо да открие остатъчен дезинфектант с водороден пероксид в питейната вода до 0,01 mg/L, далеч под граничните изисквания на националните стандарти за хигиена на питейната вода.

Процесът на откриване не изисква големи инструменти и полуколичествената преценка може да бъде завършена чрез наблюдение на синята дълбочина на разтвора с просто око, което е много подходящо за спешен мониторинг на качеството на водата на място. В сценария за откриване на йони на тежки метали като олово и живак във водни тела, симулираната с функционално нано злато пероксидаза може специфично да реагира на йони на тежки метали. Чрез промяната на интензитета на цвета на TMB може да се постигне висока селективна визуализация на йони на тежки метали с граница на откриване до 1nM и цена на откриване от само един процент от традиционната атомна абсорбционна спектроскопия.

Той показа изключително висока стойност на приложение при проверка на безопасността на питейната вода в селските райони и бърз мониторинг на места за заустване на промишлени отпадъчни води.

В областта на тестването за безопасност на храните, TMB е основният компонент за оцветяване на различни тест ленти за бързо откриване. В сценария на откриване на ензимно инхибиране на остатъци от пестициди в храната, органофосфорните и карбаматните пестициди инхибират активността на ацетилхолинестеразата. Чрез свързването на катализираната от пероксидаза промяна на цвета на TMB,-проверката на място за остатъци от пестициди в зеленчуците може бързо да бъде завършена в рамките на 10 минути.

Чувствителността на откриване отговаря на граничните изисквания на националните стандарти за безопасност на храните и е най-често използваният метод за бързо откриване на остатъци от пестициди на вътрешните селскостопански пазари и местните регулаторни отдели. При имунохроматографското откриване на колоидно злато на замърсители с малки молекули като кленбутерол и меламин, незаконно добавени в храната, ензимно катализираната усъвършенствана колориметрична технология, базирана на TMB, може да повиши чувствителността на откриване на традиционните тест ленти за колоидно злато повече от 10 пъти, постигайки точно откриване на незаконни добавки с ниска концентрация и значително намалявайки вероятността от фалшиви отрицателни резултати и пропуснати откривания.

В сценария за бързо откриване на микробно замърсяване в храната, използването на водороден пероксид, генериран по време на микробния метаболизъм, комбинирано с цветна реакция на TMB, може бързо да завърши полуколичествения скрининг на общия брой бактерии в храната в рамките на 2 часа. В сравнение с традиционния 48-часов метод за култивиране на плочи, времето за откриване е значително съкратено, което е много подходящо за бърз контрол на качеството на производствените линии на храни в предприятията за производство на храни. При бързото откриване на афлатоксин В1 в зърнени и маслени храни, базираната на TMB система за откриване ELISA има минимална граница на откриване от 0,1 μg/kg, отговаряйки напълно на строгите изисквания за ограничение на афлатоксин в националните храни. Разходите за откриване са много по-ниски от тези на методите за откриване на масова спектрометрия с големи инструменти, което го прави подходящ за-мащабни изследвания на безопасността на зърнени и маслени храни.